Полимеразды тізбекті реакция

Соңғы жиырма жылында ерекшеленді кеңінен енгізумен биологиялық, медициналық және ауыл шаруашылығы ғылымдары молекулярлық-генетикалық әдістері.
Басында 70-жылдардың көрінген, молекулалық биология жетті белгілі бір дәрежеде аяқталу. Осы кезеңде басты объектісі молекулярлық-генетикалық зерттеу барысында микроорганизмдер. Көшу эукариотам алдына зерттеушілер мүлдем жаңа проблемалар, олар болуы мүмкін емес шешілді пайдалана отырып, істеп тұрған уақытта генетикалық әдістерін талдау. Серпіліс молекулярлық генетиканың арқасында пайда болуына, жаңа эксперименттік құрал — рестрикационных эндонуклеаз. Кейінгі жылдары саны әдістерін тікелей талдау ДНК негізделген сапалы тәсілдерге ажыратылады, басындағы қарқынды ұлғаяды.
Қазіргі заманғы технологиялар көптеген жағдайларда мүмкіндік берді одан да терең деңгейде бастау биязы құрылымдық-функционалдық ұйымның ядролық және внеядерных геномдарын әр түрлі организмдер. Ерекше маңызы бұл жүргізілсін үшін жаңа әдістерін әзірлеу әртүрлі ауруларды емдеудің және диагностика. Кем емес маңызды болып пайдалану мүмкіндігін жетістіктері молекулалық генетиканың популяциялық биология және селекция анықтау және талдау үшін генетикалық өзгергіштік популяциялар, сорттары мен штаммдарының сәйкестендіру және төлқұжаттау шаруашылық бағалы дарақ жасау, генетикалық түрлендірілген организмдерді және басқа да мәселелерді шешу.
Әрбір әдіс, оның артықшылықтары мен кемшіліктері. Жоқ әмбебап әдісі, онда еді мүмкіндік шешуге барлық туындайтын мәселелер. Сондықтан, таңдау нақты әдіс үшін жүргізілетін зерттеудің маңызды кезеңдерінің бірі болып табылады кез келген ғылыми жұмыс.
1-тарау. Әдеби шолу
1.1 ашылу Тарихы полимеразды тізбекті реакция (ПТР)
1983 ж. Қ. Б. Мюллис және т. б. жарияладық және патенттеді полимеразды тізбекті реакция əдісі (ПТР), ол олар болды көрсетуге глубочайшее әсер ететін барлық зерттеулер мен қолданбалы пайдалану нуклеин қышқылдары. Мәні бұл әдістің үшін, молекулалық биология және генетика кафедрасы болғаны соншалықты ауқымды және анық, бұл, міне, жеті жылдан кейін авторға берілді бойынша Нобель сыйлығы химия.
Басында әдісті пайдалану әрбір циклінен кейін қыздыру-салқындату тура келді қосуға реакционную қоспасы ДНК-полимеразу, өйткені ол инактивировалась жоғары температурада қажетті бөлу үшін тізбектің спираль, ДНК. Өткізу рәсімі реакциялар салыстырмалы тиімсіз, талап етті көп уақыт және ферментінің. 1986 жылы полимеразды тізбек реакциясы әдісі елеулі түрде жақсарды. Ұсынылды пайдалануға ДНК полимеразы бірі термофильных бактериялар. Бұл ферменттер болып шықты термостабильными және ұстап тұруға қабілетті көптеген цикл реакция. Олардың пайдалануға мүмкіндік берді жеңілдету және автоматтандыру өткізу ПТР. Бірі термостабильных ДНҚ-полимераз бөлініп, бірі бактериялардың Thermus aquaticus және аталды Taq-полимеразой.
Мүмкіндігі амплификации кез келген сегмент, ДНҚ нуклеотидтер бірізділігі, оның белгілі, және оны алу аяқталғаннан кейін ПТР гомогенном түріндегі және препаративном саны жасайды ПТР балама әдісімен молекулярлық клондау қысқа фрагменттерін ДНК. Кезде туындайды қажеттілігі қолдану күрделі әдістемелік тәсілдерді пайдаланатын гендік инженерия, кәдімгі клонировании. Әзірлеу ПТР әдісін көбінесе кеңейтті әдістемелік мүмкіндіктері молекулалық генетика, және, атап айтқанда, гендік инженерия, әрі, сондықтан, бұл түбегейлі өзгертті және күшейтті ғылыми әлеуеті көптеген оның бағыттары.
1.2 Түрлері полимеразды тізбекті реакция (ПТР)
·Вложенная ПТР қолданылады санын азайту үшін жанама өнімдер реакциялар. Пайдаланады екі жұп праймеров және жүргізеді, екі тізбекті реакциялар. Екінші жұп праймеров амплифицирует учаскесі ДНК өнімнің ішіндегі бірінші реакция.
·Инвертированная ПТР қолданылады, егер белгілі аз ғана учаскесі ішіндегі қажетті кезектілігі. Бұл әдіс әсіресе пайдалы болған анықтау керек, көршілес реттілігі кейін кірістіру ДНҚ-ның геном. Жүзеге асыру үшін инвертированной ПТР жүргізеді бірқатар разрезаний ДНК — рестриктазами <#»justify»>полимеразды тізбекті реакция астар
·Топ-спецификалық ПТР — ПЦР үшін мәндес <#»center»>1.3 полимеразды тізбекті реакция
Ашық ортасында 80-шы жылдардың, полимеразды тізбекті реакция (ПТР) қабілетті санын көшірмелерін бастапқы сынама миллиондаған рет бірнеше сағат ішінде. Барысында әрбір цикл реакция келген бастапқы молекулалар түзілетін екі көшірмесі. Әрбір синтезделген ДНҚ көшірмелерін бола алады матрицамен синтездеу үшін жаңа көшірмелерін ДНК келесі циклінде. Осылайша, көп мәрте қайталау цикл әкеледі өсуі көшірмелерінің санын геометриялық прогрессияда. Бірі есептеу керек, бұл кезде 30 циклдерінің саны, көшірмелерінің бастапқы молекулалар құрайды, 1 миллиардтан астам. Тіпті ескерілсін барысында әрбір цикл дуплицируются барлық ампликоны, онда жалпы саны көшірмелерін, бұл құрайды жеткілікті үлкен саны.
Әрбір цикл полимеразды тізбекті реакция (ПТР) мынадай кезеңдерден тұрады:
·Денатурация — температураның Көтерілуі тудырады раскручивание және расщепление двухцепочечной ДНК молекулалары екі одноцепочечные;
·Жасыту — температурасының Төмендеуі мүмкіндік береді праймерам қосылуға комплементарным учаскелеріне ДНК молекулалары;
·Элонгация — Фермент ДНҚ-полимераза достраивает комплементарную тізбегі.
Үшін амплификации сайланған бөлігін пайдаланады екі олигонуклеотидных праймера (таңғы ас), фланкирующих белгілі бір учаскесі ДНК. Праймеры бағытталған 3-ұштары бір-біріне қарама-жағына да сол ретпен, қажет амплифицировать. ДНК-полимераза жүзеге асырады синтез (аяқтауға) өзара комплементарных ДНҚ тізбегінің бастап праймеров. Кезінде ДНК синтезі праймеры физикалық встраиваются тізбегіне новосинтезирующихся молекулалардың ДНК. Әрбір тізбек ДНК молекулалары пайда болатын бірінің көмегімен праймеров бола алады матрицамен синтезі үшін комплементарной тізбек ДНК көмегімен басқа праймера.
1.4 Жүргізу полимеразды тізбекті реакция (ПТР)
Полимеразную цепную реакциясын жүргізеді, арнайы жұқа қабатты полипропиленді шыны, үйлесімді мөлшері бойынша пайдаланылатын, термоциклером (амплификатором) — аспаппен, ол бақылайды, температуралық және уақытша сипаттамалары кезеңдерін полимеразды тізбекті реакция (ПТР).
1.5 әдістің Принципі полимеразды тізбекті реакция
Полимеразды тізбекті реакция (ПТР) әдісі амплификации ДНҚ in vitro, оның көмегімен бірнеше сағат бойы атауға болады размножить белгілі бір реттілігі ДНҚ миллиардтаған. Алу мүмкіндігі зор көшірмелерінің санын бір қатаң белгілі бір учаскесінің геномның айтарлықтай жеңілдетеді зерттеу қолда бар үлгідегі ДНК.
Полимеразды тізбекті реакция жүргізуге арналған бірқатар шарттарды сақтау қажет:
1.5.1 Болуы реакциялық қоспаның компоненттерін бірқатар
Негізгі компоненттері реакциялық (ПТР) қоспасы болып табылады: Трис-HCl, KCl, MgCl2, қоспасы нуклеотидтрифосфатов (АТФ, ГТФ, ЦТФ, ТТФ), праймеры (олигонуклеотиды), препарат, талданатын ДНК, термостабильная ДНҚ-полимераза. Әрбір құрамдас реакциялық қоспаны тікелей қатысады полимеразды тізбекті реакция (ПТР), ал концентрациясы, реагенттерді тікелей әсер етеді барысы амплификации.
·Трис-HCl — pH анықтайды реакциялық қоспаны жасайды буферлік сыйымдылығы. Белсенділігі ДНК полимеразы байланысты pH ортаны, сондықтан мәні сутекті көрсеткішіне тікелей әсер етеді барысы полимеразды тізбекті реакция. Әдетте, мәні pH шегінде орналасқан 8 — 9,5. Жоғары pH мәні алынады, яғни температура, рн Тр-HCl буфер құлайды.
·KCl — концентрациясы хлориді калий 50 мМ-ге дейін әсер етеді ағуы процестерін денатурации және күйдіру, концентрациясы 50 мМ ингибирует ДНК-полимеразу.
·MgCl2 — өйткені ДНҚ-полимераза болып табылады Mg2+ — тәуелді ферментом, онда магний иондарының шоғырлануы әсер етеді ферментінің белсенділігі (Mg2+ түзеді кешендері НТФ — бұл кешендер үшін субстрат болып табылады полимеразы). Жоғары концентрациясы ұлғаюына әкеледі спецификалық емес амплификации, ал төмен жүргізеді — ингибированию реакциялар, оптимум (әр түрлі полимераз) орналасқан облыс 0,5 — 5мМ. Сонымен қатар, концентрациясы магний тұздарының әсер етеді ағуы процестерін денатурации және күйдіру арттыру концентрациясы Mg2+ туғызады арттыру температура балқу ДНК (т. е. температура кезінде қабығы 50% двухцепочечных жіптерден ДНК разъединяются арналған одноцепочечные).
·НТФ — нуклеотидтрифосфаты болып табылады тікелей мономерами нуклеин қышқылдары. Алдын алу үшін тізбекті терминации ұсынылады равноколличественное қатынасы барлық төрт нуклеотидтрифосфатов. Төмен концентрациясы деректер компоненттерді реакциялық қоспаны арттырады қателер ықтималдығы құру кезінде комплементарной тізбек ДНК.
·Праймеры — Ең оңтайлы пайдалану болып табылады праймеров айырмашылығымен температура балқу 2 — 4оС. Кейде сақтағанда температура 4оС, немесе кейін көп замораживаний — оттаиваний праймеры құрайды екіншілік құрылымы — димеры төмендетіп тиімділігі ағу ПТР. Жою осы проблеманы азайтатын инкубация су моншасында (Т=95оС) 3 минут ішінде және кейіннен күрт салқындату тан 0ос-қа дейін.
·Препараттар ДНК — саны мен сапасы препаратты ДНҚ (матрица) тікелей әсер етеді барысы мен параметрлері полимеразды тізбекті реакция. Артық саны үлгідегі ДНК ингибирует полимеразную тізбекті реакция (ПТР). Қоспалар әр түрлі заттардың орналасқан препарат ДНҚ, сондай-ақ азайту тиімділігі жүретін полимеразды тізбекті реакция (ПТР): натрий ацетаты, натрий хлориді, изопропанол, этанол, гепарин, фенол, несепнәр, гемоглобин және т. б.

Элонгация. Әдетте әрбір түрі термостабильной ДНК полимеразы бар жеке температуралық оптимум белсенділік. Синтезінің жылдамдығын ферментом комплементарной жіпті ДНК, сондай-ақ шама болып табылады үшін ерекшелігі әр полимеразы (орта есеппен ол 30 — 60 нуклеотидтердің секундына, немесе 1 — 2 мың негіздер минутына), сондықтан уақыт элонгации іріктеледі түріне байланысты ДНК полимеразы және ұзындығы амплифицируемого.
1.5.3 Негізгі принциптері іріктеу праймеров
Құру кезінде ПТР-тест-жүйесінің негізгі міндеттерінің бірі болып табылады дұрыс таңдау праймеров жауап беруі тиіс бірқатар өлшемдер:
. Праймеры болуы тән. Ерекше назар аударылады 3-шеттері праймеров, т. б., атап айтқанда, олардың бастайды адрестік комплементарную тізбегі Taq ДНҚ-полимераза. Егер олардың ерекшелігі жеткіліксіз болса, онда, бәлкім, бұл пробиркада с реакциялық қоспамен болады жағымсыз процестер, атап айтқанда, синтез спецификалық емес ДНҚ (қысқа немесе ұзын фрагменттерін). Ол көрініп электрофорезе түрінде ауыр немесе жеңіл қосымша жолақтар. Бұл кедергі нәтижелерін бағалау реакциялар, т. б. оңай перепутать спецификалық өнім амплификации с синтезированной бөгде адамның ДНК. Бөлім праймеров және дНТФ жұмсалады синтезі, ДНҚ спецификалық емес, әкеледі елеулі жоғалту сезімталдығы.
. Праймеры тиіс құруы димеры және ілмектер, т. е. емес, құрылуы тиіс тұрақты қос тізбегінің нәтижесінде күйдіру праймеров өздерін немесе бір-бірімен.
1.5.4 Әсері «Плато»
Айта кету керек, жинақталу процесін ерекше өнімдерін амплификации бойынша геометриялық прогрессия мәселе тек шектелген уақыт, содан кейін оның тиімділігін сыни құлайды. Бұл деп аталатын әсері «плато».
Термин әсері үстірті үшін пайдаланады процесін сипаттаудың жинақтау ПТР өнімдерін соңғы цикл амплификации.
Шарттарына байланысты және санын цикл реакция амплификации кезінде нәтижеге жету үстірті әсер етеді кәдеге жарату субстраттар (дНТФ мен праймеров), тұрақтылық реактантов (дНТФ және ферменттер), саны тежегіштерін қоса алғанда, пирофосфаты және ДНК-дуплексы, бәсекелестік реактанты неспецифическими өнімдерімен немесе астар-димерами концентрациясы ерекше өнім және жартылай денатурация кезінде жоғары концентрациясы өнімдерін амплификации.
Аз бастапқы концентрациясы, ДНҚ-нысана, соғұрлым тәуекел жоғары шығу реакция плато». Бұл кезде туындауы мүмкін сонымен қатар, саны ерекше өнімдерін амплификации жеткілікті болады, талдау жасау керек. Болдырмау үшін, бұл мүмкіндік береді ғана жақсы оңтайландырылған тест-жүйелер.
1.5.5 Дайындау биологиялық материалдың сынама
ДНҚ молекуласын бөліп алатын реактивтер пайдаланады әр түрлі әдістері алға қойылған мақсаттарға байланысты. Олардың мәні экстракция (шығару) ДНК-ның биопрепараттың және жою немесе бейтараптандыру бөгде қоспаларды алу үшін препаратты ДНҚ тазалығы үшін жарамды ПТР.
Стандартты атанған және қазірдің өзінде классикалық болып саналады алу әдістері таза препарат ДНҚ сипатталған Мармуром. Ол қамтиды ферментативный протеолиз кейіннен депротеинизацией және переосаждением ДНК спиртпен. Бұл әдіс алуға мүмкіндік береді таза препарат ДНҚ. Алайда, ол өте трудоемок көздейді жұмысын осындай агрессивті бар өткір иісі бар заттар, фенол мен хлороформ.
Бірі танымал қазіргі уақытта әдісі болып табылады ДНҚ бөліп алу, ұсынылған Boom с тең авторлары. Бұл әдіс негізделген пайдалану үшін лизиса жасушалардың күшті хаотропного агент — гуанидин туындылары тиоционата (GuSCN), және кейіннен сорбция ДНК тасығышта (шыны моншақтар, диатомовая жер, әйнек «сүт» және т. б.). Кейін отмывок сынамада қалады ДНК, сорбированная тасығышта, ол оңай алынады көмегімен элюирующего буфер. Әдісі ыңғайлы, технологичен және жарамды дайындау үшін үлгідегі амплификации. Алайда, болуы мүмкін жоғалтулар ДНК салдарынан қайтымсыз сорбция тасығышта, сондай-ақ процесінде көптеген отмывок. Әсіресе үлкен мәні, ол кезде жұмыс шағын количествами ДНК үлгісінде. Сонымен қатар, тіпті следовые санын GuSCN мүмкін кедергі күш ПТР. Сондықтан пайдалану кезінде осы әдісті өте маңызды дұрыс таңдау сорбент және мұқият сақтау технологиялық өзгешеліктер.
Басқа топ сынама алу әдістерін пайдалануға негізделген ионообменников үлгідегі Chilex, айырмашылығы, шыныны, сорбируют емес, ДНК, керісінше, қоспалар келтіретін реакциялар. Әдетте, бұл технология қамтиды екі сатыда: қайнату үлгідегі қоспалардың сорбция ионообменнике. Әдісі өте тартымды қарапайымдылығы орындау. Көп жағдайда ол жарамды жұмыс істеу үшін клиникалық материал. Өкінішке орай, кейде кездеседі, үлгілері осындай қоспалармен мүмкін емес жою арқылы ионообменников. Сонымен қатар, кейбір микроорганизмдер жоқ ұйымына берілу бұзылуына қарапайым қайнату арқылы. Бұл жағдайларда енгізу қажет қосымша сатыларын өңдеу үлгідегі.
Осылайша, сынама алу әдісін таңдау керек жатуы түсіне отырып, жүргізу мақсаттары болжамды талдау.
1.5.6 Амплификация
Реакция жүргізу үшін амплификации қажет дайындауға реакционную қоспасы және енгізу, оған талдау үлгісі-ДНК. Бұл ескеру маңызды кейбір ерекшеліктерін күйдіру праймеров. Бұл, әдетте, талданып отырған биологиялық үлгіде отырса, әр түрлі ДНК молекулалары, оларға қолданылатын реакциялар праймеры бар ішінара, ал кейбір жағдайларда елеулі, гомологию. Сонымен қатар, праймеры мүмкін отжигаться бір-бірімен құра отырып, астар-димеры. Және нәрсе әкеледі айтарлықтай шығысы праймеров арналған синтез жанама (спецификалық емес) реакция өнімдерінің және соның салдары ретінде, айтарлықтай азайтады сезімталдығы. Бұл қиындатады немесе болдырмайды оқу нәтижелерін реакциялар жүргізу кезінде электрофорез.

Дұрыс бағалау үшін ПТР нәтижелерін түсіну маңызды, бұл әдіс болып табылады сандық. Теориялық өнімдері амплификации бірлі-жарым молекулалардың ДНК нысана табылуы мүмкін көмегімен электрофорез кейін 30-35 цикл. Алайда, бұл іс жүзінде орындалады жағдайда ғана реакция жағдайында өтіп, жақын тамаша, бұл өмірде жиі кездеседі. Әсіресе үлкен әсері амплификации көрсетеді, тазалық дәрежесі препараттың ДНК, т. е. болуы реакциялық қоспаның сол немесе басқа тежегіштерін, олардан құтылу кейбір жағдайларда, кейде өте қиын. Кейде, олардың қатысуы мүмкін болмаса амплифицировать тіпті ондаған мың молекулалар ДНҚ-нысана. Осылайша, арасында тікелей байланыс бастапқы санымен ДНҚ-нысана мен түпкі санымен өнімдерін амплификации жиі жоқ.
2-тарау: полимеразды тізбекті реакция Қолдану
ПТР пайдаланылады көптеген салаларда үшін, талдау жүргізу және ғылыми эксперименттер.
Криминалистика
ПТР үшін пайдаланады салыстыру «деп аталатын генетикалық саусақ». Қажет үлгісі генетикалық материалдың қылмыс орнынан — қан, сілекей, ұрық, шаш және т. б. Оның салыстырады генетикалық материалмен күдікті. Жеткілікті тіпті шағын санының ДНК, теориялық — бір көшірмесі. ДНК расщепляют арналған фрагменттері, содан кейін амплифицируют көмегімен ПТР. Фрагменттері ортақ көмегімен электрофорез ДНК. Алынған суретті орналасқан белдеулерін ДНҚ деп атайды генетикалық отпечатком саусақ.
Әке болуды анықтауды
Нәтижелері электрофорез ДНК-фрагменттері, амплифицированных көмегімен ПТР. Әкесі. Бала. Анасы. Бала a. d. кейбір ерекшеліктері генетикалық іздерін ата-анасының екеуінің де, не берді, жаңа, бірегей із қалдырады.
Дегенмен «генетикалық саусақ іздері» бірегей, туыстық байланыстары, сол арқылы орнатуға болады бірнеше осындай іздерінің. Сол әдісін қолдануға болады, аздап модифицировав оны белгілеу үшін эволюциялық туыстық арасында организмдер.
Медициналық диагностика
ПТР мүмкіндік береді айтарлықтай жеделдетуге және жеңілдетуге диагностикасын тұқым қуалаушылық және вирустық аурулар. Керекті ген амплифицируют көмегімен ПТР қолдана отырып, тиісті праймеров, содан кейін секвенируют анықтау үшін мутациялар. Вирустық инфекция жұқтырғаннан кейін бірден анықтауға болады, апта немесе айлар бұрын білінбей тұрып, бірнеше симптомдары.
Дербестендірілген медицина
Кейде дәрі-дәрмектер көрсетіледі улы немесе аллергенными кейбір емделушілер үшін. Себептері бұл — бір жағынан жеке айырмашылықтар бейімділігіне және дәрілердің метаболизмі және олардың туынды. Бұл айырмашылықтар детерминируются генетикалық деңгейде. Мысалы, бір пациентке белгілі бір цитохром мүмкін неғұрлым белсенді, басқа — кем. Анықтау үшін, қандай бір түрі цитохром ие, бұл пациент ұсынылды жүргізуге ПТР-талдау қолдану алдында дәрі-дәрмектер. Мұндай талдау деп атайды алдын ала генотипированием.
Гендерді клондау
Клондау, гендердің бұл процесс бөлу гендердің және, нәтижесінде генноинженерных манипуляциялар үлкен санын алу өнімнің осы гена. ПТР үшін пайдаланылады амплифицировать ген, содан кейін əрбір салынған вектор — ДНК фрагменті, переносящий чужеродный ген сол ең немесе басқа да ыңғайлы өсіру үшін, ағзаға әсері. Ретінде векторларды пайдаланады, мысалы, плазмидтер немесе вирустық ДНК. Енгізілім гендердің чужеродный организмге әдетте өнімді алу үшін осы гена — РНҚ немесе, жиі, ақуыз. Осылайша өнеркәсіптік мөлшерде алады көптеген белоктар пайдалану үшін ауыл шаруашылығында, медицинада және т. б.
Секвенирлеу-ДНҚ —
Әдісі секвенирования пайдалана отырып, меченых флуоресцентной с меткой немесе радиоактивті изотопом дидезоксинуклеотидов ПТР ажырамас бөлігі болып табылады, өйткені барысында полимерлеу тізбегіне ДНК встраиваются туындылары нуклеотидтер, меченые флуоресцентной немесе радиоактивті белгімен. Бұл реакциясын тоқтатады, мүмкіндік беретін анықтау ережелері ерекше нуклеотидтер бөлгеннен кейін синтезделген тізбектерді суықтық.
Мутагенез
Қазіргі уақытта ПТР болды негізгі әдісімен өткізу мутагенез. ПТР қолдану мүмкіндік берді рәсімін тездетуге жүргізу мутагенез, сондай-ақ оны неғұрлым сенімді және басталады.
ПТР мүмкіндік берді талдау болуы тізбектер вирус-адам папилломасы » срезах биопсия қатерлі ісік, жатыр мойны, адам қоспадан құйылған парафинмен 40 жасқа дейін осы зерттеу. Сонымен қатар, көмегімен ПТР алдық амплифицировать және клонировать фрагменттері митохондриальной ДНК-ның қазып ми адам жасындағы 7 мың жыл!
«Лизатах жеке сперматозоидтардың адам көрсетілді мүмкіндігі бір мезгілде талдау екі локуса орналасқан әр түрлі негомологичных хромосомах. Мұндай тәсіл қамтамасыз етеді бірегей мүмкіндік жұқа генетикалық талдау және зерттеу хромосомалық рекомбинации, ДНК-полиморфизм және т. б. Талдау әдісі жеке сперматозоидтардың бірден тауып алып, практикалық қолдану, сот медицинасы, өйткені HLA-типтеу гаплоидных жасушаларын анықтауға мүмкіндік береді әке немесе анықтауға, қылмыскердің (HLA кешені жиынтығы болып табылады жұбайларда гистологиялық үйлесімділіктің басты кешені гендерінің адам; локусы кешенін HLA — ең полиморфты, барлық белгілі бар жоғары омыртқалы: шегінде қызмет түрінің әрбір локусе бар ерекше үлкен саны әр түрлі аллелей — баламалы нысандарын бір геннің).
Пайдалана отырып, ПТР, анықтауға болады дұрыстығын интеграция бөтен текті және генетикалық құрылымдардың алдын ала белгілі бір ауданы геномның оқытылатын жасушалар. Жиынтық жасушалық ДНҚ отжигается екі олигонуклеотидными затравками бірі комплементарна учаскесіне хозяйской ДНК жақын нүктесіне встраивания, ал екіншісі — реттілігі біріктірілген көрінісі » антипараллельной тізбек ДНК. Полимеразды тізбекті реакция жағдайда өзгермеген құрылымының хромосомды ДНҚ-ның болжамды жерде встройки әкеледі фрагменттерін одноцепочечной ДНҚ белгісіз мөлшерін, ал жоспарланған встройки — двухцепочечных ДНҚ фрагменттерін белгілі мөлшерін айқындайтын арасындағы қашықтықпен кей жерлерде күйдіру екі праймеров. Бұл ретте дәрежесі амплификации талданатын ауданы геномның бірінші жағдайда болады сызықтық санына байланысты циклдар, ал екінші — экспоненциальной. Экспоненциалды жинақтау процесінде ПТР амплифицируемого бөлігін алдын ала белгілі мөлшерін мүмкіндік береді көзбен көруге, оның кейінгі электрофоретического фракциялау препарат ДНҚ және бір мәнді қорытынды туралы встройке чужеродной ретпен берілген ауданы хромосомалық ДНҚ.

Добавить комментарий

Your email address will not be published.