Гистологиялық техника туралы қазақша

Гистологиялық зерттеу әдістері қолданылады зерделеу үшін құрылыстар мен функциялары жасушалар мен ұлпалардың қалыпты, патологиялық және экспериментке. Негізі гистологиялық зерттеу әдісі болып табылады гистологиялық техника кешені әдістемелік тәсілдерді дайындау кезінде пайдаланылатын препараттар жасушалар мен ұлпалардың, олардың микроскопиялық зерттеу. Микроскопиялық зерттеу, клетка және ұлпалардың жүргізілуі мүмкін екі негізгі жолдармен жағдайына байланысты зерттелетін объектісі: зерттеу, тірі жасушалар мен тіндерді зерттеу неживых жасушалар мен ұлпалардың құрылымын сақтайтын арқасында арнайы тәсілдеріне тіркеу[2].

 

1. Техника гистологиялық препараттарды дайындау үшін микроскопты
Негізгі кезеңдері дайындау гистологиялық препараттар:
1. Материал алу;
. Бақылау;
. Жуу суда;
. Сусыздандыру және тығыздау;
. Құю;
. Қималарды дайындау;
. Бояу;
. Қорытынды мұғалім.
Қысқаша сипаттамасы кезеңнен тұрады:
. Материал алу
Гистологиялық зерттеуге арналған берут тілімдерін, ағзалар мен тіндердің көлемі 1 см3. Материал мүмкіндігінше алуға мүмкіндігінше ертерек қайтыс болған соң, адамдар (зерттеу әдісі материалдың адам мәйітінің аутопсия). Диагностикалық мақсатта материалды гистологиялық зерттеу мүмкін забираться адамдардың прижизненно көмегімен арнайы құрал-саймандардың немесе операциялар кезінде. Бұл әдіс материалды алу деп аталады биопсия.
2. Бақылау
Алынған гистологиялық зерттеуге арналған материал бірден ұшырауы тиіс тіркеу. Бақылау әдісі — мата өңдеу, бекіту мақсатында оның тірі кезіндегі құрылымын. Бұл арқылы қол жеткізіледі ықпал ету матаға арнайы ерітінділер (бекіткіштер). Ең елеулі өзгеріс болып жатқан тіндерде әсерінен босату процесі болып табылады ұю (коагуляция) белоктар. Саны босату керек брать в 20-100 есе көп көлемін кусочка тіркелетін материал.
Бар фиксаторлар қарапайым және күрделі. Қарапайым жатады 10-20% формалин ерітіндісі, 96 ºс, спирт, 100 (абсолюттік) спирт, 1-2% ерітіндісі осмиевой қышқылы және т. б. Күрделі бекіткіштер: спирт — формол (спирт 70º — 100 мл. және формалин 2-5 мл) сұйықтықты Ценкера (сулема — 5 г, күкірт қышқылды натрий — 1 ж., двухромовокиолый калий — 2,5 г, дистилденген су — 100 мл., мұзды сірке қышқылы, 5 мл.) және т. б. Ұзақтығы белгілеу — бірнеше сағаттан 1 тәулікке және одан қасиеттеріне байланысты босату және сипаттағы зерттелетін материал.
3. Суда жуындыру
Белгілегеннен кейін материал жуады (көбінесе бірнеше сағат бойы ағынды сумен) бірге болудан босату үшін, оны шамадан тыс босату және әр түрлі жауын-шашынның тіркейтін сұйықтықтар.

Құрғату
Сусыздандыру мата жүргізіледі бірте-бірте (үшін жоқ сморщивания) жүргізу арқылы оны арқылы спирттер артып келе жатқан бекіністің: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. Әрбір спиртте тілімдерін орналасқан бірнеше сағаттан 1 тәулікке шамасына қарай кусочка.
5. Тығыздау (құю)
Құю кезінде кесектерін алдын ала пропитываются сол сұйықтықтармен, олар еріткіштермен үшін парафин (ксилол немесе толуол).
Құю парафин. Құю кезінде парафин кесектерін абсолютті спирт ауыстырылады қоспасы абсолютті спиртті хлороформом немесе ксилолом алынған тең, содан кейін таза ксилол және, ақырында, балқытылған қанық ерітіндісі, парафин » хлороформе, олар термостатта температура кезінде 37º дейін 1 тәулік және одан да көп. Одан әрі құю жүргізіледі термостатта температура кезінде 54º -56º үш порциях парафин. Түпкілікті құю жүргізіледі парафин қосылған балауыз, ол құяды арнайы қағаз қораптар немесе шыны тостаған, содан кейін бұл қораптар немесе тостаған пайда болғаннан кейін жер бетінде парафин пленка, суға батырады.
Жүреді толық затвердение парафин. Тілімдерді ортамен олардың парафинмен извлекают келген қорапша көмегімен балқытылған парафин, наклеивают ағаш кубиктер, өнімділігі парафинді блоктар.
Тығыздау, сондай-ақ қол жеткізуге болады қатыру арқылы кусочка органның (шұғыл биопсиясы).
6. Қималарды дайындау
Үзіктер блоктардан жасалады арналған микротоме. Кең тараған микротомы шана және замораживающий. Арнайы құрылғыларда микротома қыспаққа алынып, мұның өзі парафиновый блок және микротомный пышақ. Тетігі бар, поднимающий объектодержатель блогы бар берілген саны микрометр. Бұл мүмкіндік береді әрбір скольжении пышақ жазықтығында параллель блогының үстіңгі бетінде алуға үзіктер қалыңдығы 5-10 микрометр отырып, парафинді блоктарды.
7. Бояу
Дайындалған микротоме үзіктер боялады. Алдында бояумен бірі парафинді кесінділер міндетті түрде алып тастайды парафин (растворением » ксилоле).
Бояу қажет үшін айқын анықтауға микроскоппен көрінетін объектінің құрылымдары. Бұл боялмаған срезах көпшілігі құрылымдары бірдей преломляет жарық, сондықтан оларды қарауға мүмкін емес.
Анықтау срезе гистологиялық құрылымдардың негізделген неодинаковом олардың қатысты красителям. Бір құрылымын кесім енеді реакциясын бастап қышқыл бояғыштармен бояу және олар боялады (ацидофильные, оксифильные құрылымын) басқа жауап берсе, негізгі бояғыштармен бояу және боялады, көбінесе олар (базофильные құрылымдар). Кейбір құрылымын боялады және қышқыл және негізгі бояғыштармен бояу.
Шығу тегі бойынша ажыратады бояулар табиғи, оларға бояулар өсімдік және жануар тектес және жасанды бояулар. Бояумен өсімдік тектес болып табылады, гематоксилин, ол өндіріледі бірі кампешевого ағаш, өсіп келе жатқан Америка мен Армения.
— Бояуға, жануарлардан алынатын жатады кармин, ол өндіріледі-ұстаз кошенили өмір сүретін кактусовых ағаштар Мексикада, Армения және т. б. қазіргі уақытта көптеген бояуларды дайындайды синтетически (жасанды бояулар).
Бойынша окрашиванию анықталған гистологиялық құрылымдарды ажыратады бояулар ядролық (бояу ядро), цитоплазматические (окрашивающие цитоплазму), және арнайы, окрашивающие сайлау белгілі бір құрылымдар.
Ядролық бояу — гематоксилин, кармин, сафранин, метиленовая синь, азур, тионин.
Цитоплазматические бояулар — эозин, пикрофуксин.
Бар арнайы бояулар мен реактивтер: судан Ш (қылдары май қызғылт сары түс), осмиевая қышқылы (импрегнируемый ол май окрашиватся қара түс), резорцинфуксин Вейгерта (береді қара-көк түске эластических талшықтар), орсеин (қылдары икемді талшықты қоңыр түс). Метиленді көк бояуға көмектеседі жүйке элементтері көк түске, ал импрегнации күміспен олар иемденеді қоңыр түс.
Көбінесе гистологиялық кесінділерді бояу үшін қолданылады бояу ерітіндісімен гематоксилина (дайындалған әдісі бойынша Бемера) және 1-2% эозином [3].

Боялған және жуылған судағы үзіктер болдырмау үшін лайлану обезвоживают «спиртах (70º, 96º), просветляют» карбол-ксилоле, ксилоле, содан кейін шыныға орналасқан кесім салады тамшысын бальзам және срез жаяды покровным шынымен. Бальзам білдіреді растворенную » ксилоле шайыр бір түрі-қарағай, өсіп келе жатқан Канада (канада бальзамы), шайыр майқарағай (сібірлік бальзам) немесе арнайы синтетическую ортаға.
Зерттеу кезінде биопсия нақтылау мақсатында диагнозды гистологиялық зертханалар жүгінеді жеделдетілген материалды өңдеу. Тілімдерді тіндер мен органдардың бұл ретте өтеді нақ өңдеу кезеңдері, бірақ 5-7 күн ішінде. Кейде жүргізіледі деп аталатын шұғыл биопсиясы кезде ішінде 15-80 мин. материалды тіркейді алады үзіктер, бояйды, оларды жасайды. Жылдам ұстам жүргізеді 10% формалине, подогреваемом жалынмен оттықтары немесе пайдалана отырып, СВЧ-пеш. Тығыздау жетуде қатыру арқылы (хлорэтилом, көмірқышқылы немесе көмегімен замораживающего микротома).
2. Үлгі схемасы бояу препараттарды гематоксилин — эозином
. Парафинді немесе мұздатылған үзіктер жеткізеді су.
. Бояу гематоксилином ішінде 3-5 минут.
. Жуу, суда — 2 минут.
. Саралау спиртке, подкисленном тұз қышқылымен (1% ерітіндісі, тұз қышқылы 70% этил спиртінде), бірнеше секундтан кейін қайта қалпына келтірумен подщелоченной сумен (шамамен 1 минут). Бұл кезең болғаны жақсы, бірақ міндетті емес.
. Жуу, ағынды сумен шаяды.
. Тазартылған сумен шаю.
. Бояу 1% эозином — 1-2 минут.
. Тазартылған сумен шаю.
. Сусыздандыру спиртке — 2 мин.
. Просветление » ксилоле — 2 мин
. Қорытынды кесінді — тамшы бальзам, жамылғы шыны.
3. Зерттеу әдістері гистология және цитология
Зерттеу әдістері гистология қамтиды гистологиялық препараттарды дайындау және оларды зерттеу микроскоптың көмегімен.
Негізгі әдісі гистологиялық зерттеу болып табылады жарық микроскопия, түрлерімен мыналар болып табылады:
фазалы-контрастная микроскопия — негізделген жылжыған фазалардың жарық толқындардың өту кезінде күн сәулесі арқылы әр түрлі тығыздығы бойынша зерттелетін объектінің құрылымын, бұл әкеледі арттыру кереғарлығы осы құрылымдардың және қарауға мүмкіндік береді боялмаған және тірі жасушалар;
интерференционная микроскопия — негізделген әртүрлі барысында сәулелерінің беретін мұндай объектінің бейнесі, ол туралы айтуға болады концентрациясы әр түрлі заттардың клеткадағы;
поляризационная микроскопия — негізделген екі лучепреломлении жасушалық құрылымдар, зерттеуге мүмкіндік береді спираль немесе көрінетін басқа да зерттеу әдістері құрылымын (мысалы, миофибриллы);

ультракүлгін микроскопия — негізделген ультракүлгін бөлігінде спектрін жарықтандыру үшін объект.
Зерттеу үшін жұқа ішкі құрылысының жасушалар мен межклеточных құрылымдардың (ультраструктур) электронды микроскопты пайдаланады.
Анықтау үшін жасушаларында әр түрлі химиялық қосылыстар (амин қышқылдары, белоктар, майлар, көмірсулар, минералды заттар және т. б.) пайдаланады гистохимиялық зерттеу әдістері, негізделген пайдалану бояғыштар, сайлау байланыстырылады тек сол химиялық қосылыстармен жасушалары зерделеу қажет, және бояйды олардың ете отырып, көрінетін.
Әдісі радиоавтографии негізделген енгізу тор изотоптардың жиынтық тиісті құрылымдар (мысалы, меченый тимидин встраивается » ядро жасушаларының, синтезирующих ДНК) зерттеу үшін қолданылады ағымының синтетикалық процестердің тіндерінде.
Оқу үшін механизмдердің пролиферациясы мен дифференцировка жасушалар, олардың реакциялары әртүрлі әсер ету әдісін қолданады мәдениет жасушалар мен ұлпалардың, ол негізделген өсіру организмнен тыс жасанды қоректік орталарда әр түрлі жасушалар.
Бірі қазіргі заманғы әдістерін, пайдаланылатын гистология, болып табылады конфокальная микроскопия алуға мүмкіндік беретін үш өлшемді сурет зерттелетін объектінің, арнайы компьютерлік бағдарламалар арқылы[1].

Добавить комментарий

Your email address will not be published.